Анализ содержания глюкозы в крови

Основной недостаток - они определяют не только глюкозу, но и ряд других веществ, обладающих восстанавливающими свойствами, (глутатион, мочевую кислоту, эрготионеин, креатинин, глюкуроновую кислоту, витамин С и др.) Определяемое “кажущееся количество сахара” крови значительно выше истинной концентрации глюкозы. Разность между “кажущимся сахаром” и истинной глюкозой называется остаточной редукцией, составляющей по методу Хагедорна—Иенсена 0,8—1,6 ммоль/л (15—30 мг/дл). Так как величина остаточной редукции у одного и того же пациента практически постоянна и не зависит от выделения инсулина или приема углеводов, колебания уровня “кажущегося сахара” в крови определяются в основном сдвигами концентрации глюкозы. Благодаря этому определение “кажущегося сахара” в крови методом Хагедорна—Иенсена, предложенным в 1925 г., до сих пор не утратило практической ценности, хотя метод достаточно трудоемок.
2. Колориметрические. Данные методы почти не используются.
Колориметрические методы основаны на цветных реакциях между глюкозой и различными хромогенами. Специфичность указанной группы методов существенно выше, чем редуктометрических. Данные методы крайне неудобны, токсичны и обладают низкой точностью, поэтому целесообразно подробнее рассмотреть ферментативные.
3. Ферментативные:
а) глюкозооксидазный:
- фотометрический по конечной точке;
- фотометрический кинетический;
- отражательная фотометрия – сухая химия;
- электрохимический
б) гексокиназный.
Глюкозооксидазный метод
Сегодня наиболее распространены методы, основанные на использовании фермента – глюкозооксидазы, которая катализирует перенос двух водородных атомов с первого углеродного атома глюкозы на кислород, растворенный в жидком реагенте. При этом в ходе реакции образуется в эквимолярных количествах перекись водород, то есть концентрация образовавшейся перекиси водорода точно равна определяемой концентрации глюкозы. Следовательно, использование глюкозооксидазной реакции, трансформировало задачу определения концентрации глюкозы в задачу определения концентрации перекиси водорода, которая значительно проще первой. Существует несколько способов, широко используемых сегодня в лабораторной практике (см. схему).

Среди всех перечисленных способов более распространен фотометрический биохимический метод, в котором молекулы перекиси водорода под действием фермента пероксидазы расщепляются с образованием активной формы кислорода – супероксид анион-радикала – О2-, он в свою очередь окисляет хромоген, что приводит к значительному изменению спектра поглощения хромогена.